在電化學(xué)發(fā)光免疫測定（electrochemluminescenceimmunoassay，ECLI）中應(yīng)用的標(biāo)記物為電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的底物三聯(lián)吡啶釕，其衍生物N-羥基琥珀酰胺（NHS）酯可通過化學(xué)反應(yīng)與抗體或不同化學(xué)結(jié)構(gòu)的抗原分子結(jié)合，制成標(biāo)記的抗體或抗原。ECLI的測定模式與ELISA相似，分二個步驟進(jìn)行。以雙抗體夾心法測定抗原為例，第一步在試管中進(jìn)行，反應(yīng)物為Ru（bpy）32+標(biāo)記的抗體、吸附在磁性微球上的固相抗體以及受檢的標(biāo)本，反應(yīng)后除由標(biāo)記抗體、固相抗體與標(biāo)本中的抗原形成的夾心復(fù)合物外，尚有多余的標(biāo)記抗體和固相抗體。第二步是將反應(yīng)液輸入特殊的檢測儀器的反應(yīng)室中（圖18-3），隨即用含三丙胺（TPA）的緩沖液沖洗。反應(yīng)室電極下有磁鐵。含磁性微球的夾心復(fù)合物及游離的固相抗體被吸附在電極表面，游離的標(biāo)記抗體隨沖洗液流出。此時在反應(yīng)室中即發(fā)生如圖18-1的電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。發(fā)出的光由光電倍增管轉(zhuǎn)為信號，通過電信號的測定反映標(biāo)本中抗原的含量。

ECLI具有以下優(yōu)點(diǎn)：①標(biāo)記物在再循環(huán)利用，使發(fā)光時間更長、強(qiáng)度更高、易于測定；②敏感度高，可達(dá)pg/ml或pmol水平；③線性范圍寬，＞10⁴；④反應(yīng)時間短，20min以內(nèi)可完成測定；醫(yī)|學(xué)教育網(wǎng)搜集整理⑤試劑穩(wěn)定性好，2～5℃可保持一年以上。