利用抗原-抗體反應(yīng)的顯著特異性,來進(jìn)行細(xì)菌的鑒別和血清學(xué)定型,已有半個多世紀(jì)的歷史。細(xì)菌菌體或鞭毛抗原的特異性抗體的存在,使得人們可以建立一些快速方法來檢測以食品為載體的病原。已經(jīng)建立的沙門氏菌免疫學(xué)檢測方法有許多種,大致可分為以酶標(biāo)抗體(ELISA),熒光抗體染色(免疫熒光法),同位素標(biāo)記抗體(放射免疫試驗)為基礎(chǔ)的方法及其它多種以抗體為基礎(chǔ),利用乳膠凝集、免疫傳感器、免疫擴(kuò)散及免疫色譜技術(shù)的方法。但常規(guī)中最廣泛采用的是以雙位點ELISA技術(shù)即夾心ELISA為基礎(chǔ)的方法。此法改進(jìn)后用有放射活性的同位素替代標(biāo)記抗體,概括地說,是指以固定在固體基質(zhì)上的“捕捉”抗體來捕捉目標(biāo)抗原,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的成分,加入第二種酶標(biāo)抗體,此者結(jié)合在捕捉到的抗原的不同位點上,第二次洗滌后加入酶作用基質(zhì),并令其與顏色成分反應(yīng),然后用分光光度法即很容易檢測到目標(biāo)抗原。采用微量滴定板作為固態(tài)基質(zhì)使反應(yīng)形式標(biāo)準(zhǔn)化,并促成其自動化。
應(yīng)用微量板ELISA法(Salmonelletest1)對進(jìn)出口動物產(chǎn)品(魚粉、肉骨粉等)進(jìn)行沙門氏菌檢測醫(yī)學(xué)教育|網(wǎng)。該法采用預(yù)先包被了沙門氏菌(A-E群)單克隆抗體的微量板,加入經(jīng)增菌處理的樣品,反應(yīng)后再加入一定的指示劑,作用畢后用酶標(biāo)儀測定OD值來判定結(jié)果。食物樣品經(jīng)適當(dāng)?shù)脑鼍幚?,也可用此法進(jìn)行沙門氏菌檢測。ELISA法檢出沙門氏菌的極限范圍在105~106個細(xì)胞/ml,因此,要得出可靠的結(jié)果,食物樣品首先必需進(jìn)行預(yù)增菌、選擇性增菌,通常還要在含有D-甘露糖的肉湯(M肉湯)中進(jìn)行后增菌,以促進(jìn)鞭毛發(fā)育。總的來說,標(biāo)準(zhǔn)的ELISA法樣品的制備,約需要經(jīng)過40~48h的孵育才能完成。黎兆滾等人的微量板ELISA法(Salmonellatest1)樣品制備過程分三步,共耗時24h:①選用營養(yǎng)肉湯進(jìn)行預(yù)增菌(6h),使“致傷”、冷凍的沙門氏菌復(fù)蘇。②使用選擇性培養(yǎng)基RV進(jìn)行增菌(14h),使沙門氏菌大量繁殖,同時抑制其它雜菌生長。③使用營養(yǎng)肉湯(蛋白胨水)進(jìn)行后增菌(4h),使沙門氏菌的數(shù)量大大增加。比上述標(biāo)準(zhǔn)的ELISA法樣品制備過程縮短了一半的時間。ELISA方法本身,則僅需要大約2h而已(其中30min是操作時間,90min是孵育時間)。相比之下,黎兆滾等人的方法可在27h內(nèi)完成,比上述方法縮短了一半的時間。