1. 目的：

保證Roche E1010全自動免疫分析儀的正確操作，保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。

2. 適用范圍：

臨床血液實(shí)驗(yàn)室

3. 項(xiàng)目名稱：

血漿肌鈣蛋白T（TNT），血漿肌紅蛋白（MYO），血漿肌酸激酶同工酶（CK-MB）。

4. 項(xiàng)目方法：

電化學(xué)發(fā)光法

5.原理：

雙抗體夾心法

5.1 血漿肌鈣蛋白T：人血清中血清/血漿肌鈣蛋白T與其相應(yīng)抗體（生物素標(biāo)記和三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的抗TNT單抗）在反應(yīng)池中相遇，形成雙抗體復(fù)合物。加入鏈霉素包被的微粒子后，這個(gè)抗體復(fù)合物與微粒子結(jié)合。當(dāng)輸入到流動池后，由于磁性的作用，微粒子被捕獲到電極表面，未結(jié)合的抗體等物質(zhì)被洗去?；瘜W(xué)發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕和電子供體三丙胺（TPA）在電極表面發(fā)生電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，通過測定發(fā)出的光強(qiáng)度，換算出待測標(biāo)本中抗原的濃度。

5.2 血漿肌紅蛋白：人血清中血清/血漿肌紅蛋白與其相應(yīng)抗體（生物素標(biāo)記和三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的抗肌紅蛋白單抗）在反應(yīng)池中相遇，形成雙抗體復(fù)合物。加入鏈霉素包被的微粒子后，這個(gè)抗體復(fù)合物與微粒子結(jié)合。當(dāng)輸入到流動池后，由于磁性的作用，微粒子被捕獲到電極表面，未結(jié)合的抗體等物質(zhì)被洗去?；瘜W(xué)發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕和電子供體三丙胺（TPA）在電極表面發(fā)生電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，通過測定發(fā)出的光強(qiáng)度，換算出待測標(biāo)本中抗原的濃度。

5.3 血漿肌酸激酶：人血清中血清/血漿肌酸激酶同工酶與其相應(yīng)抗體（生物素標(biāo)記和三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的抗肌酸激酶同工酶單抗）在反應(yīng)池中相遇，形成雙抗體復(fù)合物。加入鏈霉素包被的微粒子后，這個(gè)抗體復(fù)合物與微粒子結(jié)合。當(dāng)輸入到流動池后，由于磁性的作用，微粒子被捕獲到電極表面，未結(jié)合的抗體等物質(zhì)被洗去?；瘜W(xué)發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕和電子供體三丙胺（TPA）在電極表面發(fā)生電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，通過測定發(fā)出的光強(qiáng)度，換算出待測標(biāo)本中抗原的濃度。

5.4加入試劑R1（生物素標(biāo)記的抗TNT/MYO/CK-MB單抗）、試劑R2（三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的抗TNT/MYO/CK-MB單抗）和樣品，孵育9分鐘→加入M（鏈霉素標(biāo)記包被的微粒子），孵育9分鐘→測量光強(qiáng)度。

6.試劑：

Roche 公司配套試劑

6.1 規(guī)格R1 10 ml * 1瓶R2 10 ml * 1瓶M 6.5 ml * 1瓶6.2試劑盒組成6.2.1 R1（生物素標(biāo)記的抗TNT單抗）

生物素標(biāo)記的抗TNT單抗（大鼠） 1.5 mg/L磷酸鹽緩沖液 100 mol/L，pH 6.0防腐劑R2（三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的抗TNT單抗）

三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的抗TNT單抗（大鼠） 1.2 mg/L磷酸鹽緩沖液 100 mol/L，pH 6.0防腐劑M（鏈霉素包被的微粒子）

鏈霉素包被的微粒子 0.72 mg/mL防腐劑6.2.2 R1（生物素標(biāo)記的抗肌紅蛋白單抗）

生物素標(biāo)記的抗肌紅蛋白單抗（大鼠） 7.0 mg/L磷酸鹽緩沖液 85 mol/L，pH 6.5疊氮鈉 < 0.1 %防腐劑R2（三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的抗肌紅蛋白單抗）

三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的抗肌紅蛋白單抗（大鼠） 4.8 mg/L磷酸鹽緩沖液 85 mol/L，pH 6.5疊氮鈉 < 0.1 %防腐劑M（鏈霉素包被的微粒子）

鏈霉素包被的微粒子 0.72 mg/mL防腐劑6.2.3 R1（生物素標(biāo)記的抗肌酸激酶同工酶單抗）

生物素標(biāo)記的抗CK-MB單抗（大鼠） 1.2 mg/L磷酸鹽緩沖液 100 mol/L，pH 7.0防腐劑R2（三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的抗肌酸激酶同工酶單抗）

三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的抗CK-MB單抗（大鼠） 1.2 mg/L磷酸鹽緩沖液 100 mol/L，pH 7.0防腐劑M（鏈霉素包被的微粒子）

鏈霉素包被的微粒子 0.72 mg/mL防腐劑

6.3試劑準(zhǔn)備R1：即用型R2：即用型M：即用型6.4 試劑的保存和穩(wěn)定性：未打開的試劑盒：2 - 8℃豎直放置，可儲存至有效期末。

打開后在E1010上可穩(wěn)定8 w.

7.其它輔助用品：

反應(yīng)杯、蒸餾水。

8.分析前處理：

8.1 病人準(zhǔn)備：要求患者在安靜狀態(tài)下；晨起的精神、體力、情緒等因素的影響較小，是標(biāo)本采集的最佳時(shí)間；抽取肘部靜脈血。

8.2 標(biāo)本種類：EDTA或枸櫞酸鈉抗凝血漿。采血后應(yīng)盡快分離血漿。

8.3 標(biāo)本穩(wěn)定性： 注射器、試管要干燥潔凈，以避免溶血。

8.4 標(biāo)本稀釋：無需稀釋。

8.5 標(biāo)本容器：一般用真空采血管中的EDTA-K2抗凝管（淡蘭色頭蓋）。

8.6 標(biāo)本最小用量：2 ml. 8.7 標(biāo)本運(yùn)送：標(biāo)本采集于真空采血管后應(yīng)盡快送實(shí)驗(yàn)室分析，物流系統(tǒng)可加快標(biāo)本傳遞速度。2 - 8℃可穩(wěn)定1天，-20℃可穩(wěn)定12個(gè)月。若標(biāo)本不能及時(shí)轉(zhuǎn)運(yùn)到實(shí)驗(yàn)室或標(biāo)本將送到上級部門或檢測中心進(jìn)行分析，應(yīng)將真空采血管內(nèi)的標(biāo)本置冰瓶或冷藏箱內(nèi)運(yùn)輸，運(yùn)送過程中應(yīng)避免劇烈震蕩。

9.儀器：

9.1 儀器名稱和品牌：Roche E1010全自動免疫分析儀9.2 保養(yǎng)：9.3 定標(biāo)：當(dāng)試劑批號改變時(shí)也必須進(jìn)行定標(biāo)，或根據(jù)質(zhì)控值進(jìn)行定標(biāo)。

9.3.1 操作：同標(biāo)本測定。

9.3.2 分析：定標(biāo)值應(yīng)在設(shè)定范圍內(nèi)。若定標(biāo)不通過，則應(yīng)分析為試劑原因或定標(biāo)液問題，再行處理。

9.3.3 記錄：定標(biāo)記錄應(yīng)保存在定標(biāo)記錄存放盒，更換試劑應(yīng)在《試劑更換登記本》上登記。

10.質(zhì)控：

10.1 質(zhì)控品：

10.2 每天應(yīng)做2個(gè)水平的質(zhì)控品，分別為低值和高值，下列條件之一者必須加做質(zhì)控品的檢測：

10.2.1 更換不同批號的試劑時(shí)。

10.2.2 重新定標(biāo)后。

10.3 操作：同標(biāo)本測定。

10.4 分析：質(zhì)控結(jié)果允許范圍內(nèi)，失控應(yīng)在《失控分析記錄本》上進(jìn)行失控分析。

10.5 記錄：質(zhì)控結(jié)果應(yīng)記錄在《血液室室內(nèi)質(zhì)控原始記錄本》上。

11.操作步驟：

11.1 將試劑放入試劑倉，按SCAN鍵，儀器對試劑進(jìn)行掃描。

11.2進(jìn)入INVENTROY清單，檢查試劑、孵育杯、蒸餾水量、廢液量。同時(shí)顯示試劑位置、名稱及可測試數(shù)。

11.3進(jìn)入ORDER菜單。選擇NEW SAMPLE，輸入標(biāo)本號、位置號、測試項(xiàng)目。

11.4在相應(yīng)位置放入標(biāo)本，按START鍵……

11.5測試結(jié)束，結(jié)果打印或自動傳輸?shù)街形碾娔X。

12.參考值范圍：

TNT 0.000 - 0.030 ng/mL MYO ： 男性 28-72 ng/mL女性 25-58 ng/mL CK-MB 0.10 - 4.94 ng/mL

13.報(bào)告結(jié)果：

13.1 標(biāo)本檢測結(jié)果自動傳入中文電腦，數(shù)據(jù)經(jīng)操作者初次審核，初次審核結(jié)果后打印報(bào)告單，經(jīng)小組負(fù)責(zé)人再次審核后發(fā)出。

13.2 報(bào)告樣式：參見參考值范圍。

14 臨床意義：

14.1 血漿肌鈣蛋白：心肌損傷的確定性指標(biāo)， 包括無癥狀的AMI或有缺血損傷卻無明顯癥狀者。發(fā)病后3～6h升高，10～24h高峰，10～15d恢復(fù)。靈敏度50～59%，特異性96%以上。升高的程度與預(yù)后有關(guān)。心臟手術(shù)后可使cTnT升高，不能區(qū)分損傷是否由手術(shù)創(chuàng)傷所致。

14.2 血漿肌紅蛋白：小分子含氧結(jié)合蛋白。存在于心肌和骨骼肌中。AMI發(fā)病后0.5～2h升高，5～12h高峰， 18～30h恢復(fù)正常。心肌損傷最早期指標(biāo)。升高的幅度和持續(xù)時(shí)間與梗塞面積、心梗程度密切相關(guān)。Myo陰性（6～10h）可排除AMI診斷。有助于判斷再梗塞或梗塞擴(kuò)展。

14.3 CK-MB：CK-MB是早期診斷AMI靈敏指標(biāo)。發(fā)病后3h升高，10～30h高峰， 48～72h恢復(fù)。敏感度17～62%，特異性92～100%.心肌炎、多發(fā)性肌炎、進(jìn)行性肌營養(yǎng)不良、重癥肌無力均可升高。

15.實(shí)驗(yàn)性能參數(shù)：

15.1 檢測范圍：TNT： 0.010 – 25.00 ng/mL MYO： 21 – 30000 ng/mL CK-MB： 0.100 – 500.0 ng/mL 15.2 干擾因素：15.2.1 TNT： 黃疸：結(jié)合和游離膽紅素濃度 < 462 μmol/L沒有明顯干擾。溶血：血紅蛋白濃度< 1g/L時(shí)沒有明顯干擾。脂血：甘油三酯濃度< 15 g/L沒有明顯干擾。樣本有肉眼可見的溶血時(shí)不能分析……

15.2.2 MYO： 黃疸：結(jié)合和游離膽紅素濃度 < 1.11 mmol/L沒有明顯干擾。溶血：血紅蛋白濃度約14 g/L時(shí)沒有明顯干擾。脂血：甘油三酯濃度< 22 g/L沒有明顯干擾。

15.2.3 CK-MB： 黃疸：結(jié)合和游離膽紅素濃度 < 0.58 mmol/L沒有明顯干擾。溶血：血紅蛋白濃度< 15 g/L時(shí)沒有明顯干擾。脂血：甘油三酯濃度< 15 g/L沒有明顯干擾。

15.3 精密度與敏感性：TNT濃度低于400 ng/mL，不會出現(xiàn)高劑量前帶現(xiàn)象。

肌紅蛋白濃度低于30，000 ng/mL，不會出現(xiàn)高劑量前帶現(xiàn)象。

CK-MB濃度低于5000 ng/mL，不會出現(xiàn)高劑量前帶現(xiàn)象。