關(guān)于組織和細(xì)胞粗抗原的制備常用方法,醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)小編專門(mén)整理如下,請(qǐng)各位檢驗(yàn)主管技師考生仔細(xì)查看。
(1)反復(fù)凍融法:
將待破碎的細(xì)胞(有時(shí)為整塊組織)置-20冰箱內(nèi)凍結(jié),然后緩慢地融化。如此反復(fù)2次,大部分組織細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)的顆粒可被融破。
(2)冷熱交替法:
在細(xì)菌或病毒中提取蛋白質(zhì)及核酸時(shí)可用此法。操作時(shí),將材料投入沸水浴中,90℃左右維持?jǐn)?shù)分鐘,立即置于冰浴中使之迅速冷卻,絕大部分細(xì)胞被破壞。
(3)超聲破碎法:
對(duì)微生物和組織細(xì)胞多用此法。處理效果與樣品濃度和使用頻率有關(guān)。一般組織細(xì)胞皆易破碎,而細(xì)菌,尤其是真菌的厚膜孢子則較難打破。超聲波所使用的頻率從1~20kHz不等。同樣要間歇進(jìn)行,因長(zhǎng)時(shí)間超聲也會(huì)產(chǎn)熱,易導(dǎo)致抗原破壞。一次超聲1~2min,總時(shí)間為10~15min.
(4)自溶法:
利用組織和微生物的自身酶系,在一定的pH和溫度下,使其細(xì)胞裂解。自溶的溫度,對(duì)動(dòng)物組織細(xì)胞常選0~4℃,而對(duì)微生物常選室溫。自溶時(shí)常需加入少量防腐劑,如甲苯或氯仿等,NaN3不宜使用,因其能抑制酶的活力。
(5)溶菌酶處理法:
在堿性條件下(pH8.0),溶菌酶可專一破壞細(xì)菌細(xì)胞壁,適用于多種微生物。除溶菌酶外,蝸牛酶、纖維素酶等也可用于消化細(xì)菌和組織細(xì)胞。
(6)表面活性劑處理法:
常用的有十二烷基吡啶、支氧膽酸鈉等。因效果較差,已少應(yīng)用。
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