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1.預先按照一定比例將親和素（或鏈霉親和素）與酶標生物素結合，形成可溶性的親和素（或鏈霉親和素）-生物素-過氧化物酶復合物。

2.當其與反應體系的生物素化抗體相遇時，復合物中未飽和的親和素（或鏈霉親和素）結合部位即可與抗體上的生物素結合。

3.親和素與生物素間極高的親和力，使反應結合更牢固穩(wěn)定，而且特異性高。每個親和素可結合4個生物素，可同時結合多價性的生物素化衍生物，這樣就形成多級放大作用。

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