為幫助參加臨床檢驗主管技師考試的考生順利通過考試，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理臨床檢驗主管技師考試知識點(diǎn)佐劑的制備和作用提供如下，希望能幫助廣大考生順利通過臨床檢驗主管技師考試！

一、概念

佐劑（adjuvant）是指能夠增強(qiáng)免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類型的物質(zhì)，應(yīng)用時可與抗原同時或預(yù)先注射于機(jī)體。佐劑本身可以有免疫原性，也可以沒有免疫原性。

應(yīng)用佐劑的目的是為了提高抗原對機(jī)體的免疫原性，從而提高抗體的效價。顆粒性抗原（如細(xì)菌、細(xì)胞）因具有較強(qiáng)的免疫原性，一般情況下不使用佐劑即可取得較好的免疫效果。對于可溶性大分子量的蛋白質(zhì)免疫原、人工抗原，初次免疫時必須使用佐劑才能取得較好的免疫效果。另外，一般不連續(xù)兩次使用完全弗氏佐劑，以免導(dǎo)致動物嚴(yán)重反應(yīng)。

免疫佐劑的作用歸納起來有：

1、延緩抗原的釋放，保護(hù)抗原不被水解，佐劑可延長抗原在體內(nèi)滯留時間，避免頻繁注射，有利于高親和力抗體的產(chǎn)生；

2、活化巨噬細(xì)胞并促進(jìn)巨噬細(xì)胞與T和B細(xì)胞的相互作用，從而對淋巴細(xì)胞有特異性加強(qiáng)刺激的作用；

3、佐劑吸附了抗原后，增加了抗原的表面積，使抗原易于被巨噬細(xì)胞吞噬；

4、佐劑能刺激吞噬細(xì)胞對抗原的處理；

5、可刺激致敏淋巴細(xì)胞的分裂和漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體。故免疫佐劑的作用可使無免疫原性物質(zhì)變成有效的免疫原；

6、可提高機(jī)體初次和再次免疫應(yīng)答的抗體滴變；

7、改變抗體的產(chǎn)生類型以及產(chǎn)生遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，并使其增強(qiáng)。

由于佐劑常混有微量的其他物質(zhì)，這些物質(zhì)進(jìn)入機(jī)體后也可引起抗體的產(chǎn)生，影響抗體的特異性。注射完全佐劑可引起局部炎癥反應(yīng)，使局部組織壞死

二、佐劑的制備條件

佐劑的條件作為一種良好的佐劑，必須具備下列條件

1、增加抗原的表面積，并改變抗原的活性基團(tuán)構(gòu)型，從而增強(qiáng)抗原的免疫原性；

2、佐劑與抗原混合能延長抗原在局部組織的存留時間，減低抗原的分解速度，使抗原緩慢釋放至淋巴系統(tǒng)中，持續(xù)刺激機(jī)體產(chǎn)生高滴度的抗體；

3、佐劑可以直接或間接激活免疫活性細(xì)胞并使之增生，從而增強(qiáng)了體液免疫、細(xì)胞免疫和非特異性免疫功能；

4、良好的佐劑應(yīng)具有無毒性或副作用低的特點(diǎn)。

三、常用佐劑的種類和制備

佐劑主要可分為兩種：一種本身具有免疫原性，如百日咳桿菌、抗酸桿菌（結(jié)核分枝桿菌）以及革蘭陰性桿菌等；另一種本身無免疫原性，如氫氧化鋁、磷酸鈣、礦物油乳劑、表面活性劑等。目前應(yīng)用最多的是弗氏佐劑（Freund adjuvant）。

1、弗氏佐劑

弗氏佐劑是目前動物實(shí)驗中最常用的佐劑，分為不完全弗氏佐劑和完全弗氏佐劑。不完全弗氏佐劑是液體石蠟與羊毛脂混合而成，組分比為1～5：1，可根據(jù)需要而定，通常為2：1.不完全佐劑中加卡介苗（最終濃度為2～20mg/ml）或死的結(jié)核分枝桿菌，即為完全弗氏佐劑（FCA）。 一般首次注射時用1/2體積FCA加上1/2體積的抗原進(jìn)行乳化，第二次或第三次注射時用不完全佐劑或不用佐劑。如不加佐劑，則抗原量增大10-20倍。

配制方法：按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內(nèi)，用超聲波使之混勻，高壓滅菌，置4℃下保存?zhèn)溆谩?

在免疫動物前，先將弗氏佐劑與抗原按一定比例混合，佐劑和抗原體積比一般為1：1，制備成“油包水”乳狀液。因為含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化復(fù)合物，注射入動物體內(nèi)時一定要保持乳化狀態(tài)?？乖昧恳暱乖肿恿坎煌懊庖咴约懊庖邉游锊煌幸欢ú町?，無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)和固定模式。一般是每兔（約2kg重）或每羊（約20kg重）第1次注射抗原1mg，以后逐次增加抗原量，最多每次不超過3mg.佐劑與抗原乳化可按如下方法進(jìn)行：

（1） 研磨法

先將佐劑加熱并取適量放入無菌的玻璃研缽內(nèi)，待冷卻后再緩緩滴入等體積的抗原溶液，邊滴邊按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后，繼續(xù)研磨一段時間，使之成為乳白色粘稠的油包水乳劑。本法適于制備大量的佐劑抗原，缺點(diǎn)是研缽壁上粘附大量乳劑，抗原損失較大。

（2） 注射器混合法

將等量的弗氏佐劑和抗原溶液分別吸入兩個注射器內(nèi)，兩注射器之間以一細(xì)膠管相連，注意排凈空氣，然后交替推動針管，直至形成粘稠的乳劑為止。本法優(yōu)點(diǎn)是容易做到無菌操作，抗原損失少，適用于制備少量的抗原乳劑。但同時難以乳化完全，個別抗原，用塑料注射器根本推不動，而用玻璃注射器又有滲漏。制備好的乳化劑經(jīng)鑒定才能適用。鑒定方法是將乳化劑滴入冷水中，若保持完整不分散，成滴狀浮于水面，即乳化完全，為合格的油包水劑。

（3） 超聲

實(shí)驗室條件好點(diǎn)的，比如說有超聲破碎儀的，一定要控制超聲頻率和時間，超聲容易激發(fā)一些自由基，對抗原有未知損害。乳化方法要根據(jù)抗原和需要而定。

2、氫氧化鋁佐劑

取5%硫酸鋁溶液250ml，在強(qiáng)烈攪拌下加入5%氫氧化鈉溶液100ml，用生理鹽水離心洗滌沉淀2次，再懸入生理鹽水中使達(dá)250ml.免疫接種時，取適量氫氧化鋁佐劑加等體積抗原即可免疫。

3、明礬佐劑

鉀鋁礬（硫酸鋁鉀）在一定pH條件下產(chǎn)生氫氧化鋁膠體吸附抗原而產(chǎn)生佐劑效應(yīng)。制備方法是用生理鹽水溶解蛋白質(zhì)抗原，在攪拌下緩慢滴入一定量10%硫酸鋁鉀溶液，用NaOH調(diào)pH到6.5，此時溶液變成乳狀懸液，離心后去掉上清液，沉淀用生理鹽水洗滌二次，加入硫柳汞防腐，4℃保存?zhèn)溆谩Ｃ鞯\佐劑一般用于肌肉注射，皮下注射容易引起肉芽腫和膿腫。

4、脂質(zhì)體

脂質(zhì)體包封抗原后，可使抗原延緩釋放，并且脂質(zhì)體顆粒有刺激機(jī)體免疫反應(yīng)的作用。因此，用脂質(zhì)體包封的抗原免疫動物可提高免疫效果。