樣本的質(zhì)量控制是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)主管技師考試需要了解的知識(shí)點(diǎn)，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)小編搜集整理了相關(guān)內(nèi)容，希望對(duì)廣大復(fù)習(xí)備考的考生有所幫助。

用于流式分析的樣本種類(lèi)很多，包括外周血、骨髓穿刺液、骨髓活檢物、組織活檢物、漿膜腔積液、腦脊液、皮膚、黏膜（內(nèi)窺鏡活檢物）、細(xì)針穿刺物等等。樣本的條件控制可能是免疫表型分析質(zhì)控最困難的環(huán)節(jié)之一。每種樣本都有不同的采集、保存、運(yùn)輸和制備要求。

首先，觀測(cè)樣本外觀：有嚴(yán)重溶血、凝聚或壞死的樣本應(yīng)棄用。

第二，單細(xì)胞懸液的獲取：外周血和骨髓穿刺液為天然單細(xì)胞懸液；活檢組織常用機(jī)械分離和酶消化兩種方法。不同的實(shí)驗(yàn)要求適用不同的方法。對(duì)于需要進(jìn)行膜抗原標(biāo)記的，不僅是要獲得足夠的單細(xì)胞懸液，還要盡量保證細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整性和抗原性，機(jī)械法較適用。只需進(jìn)行細(xì)胞周期或DNA倍體分析的，在機(jī)械法的基礎(chǔ)上加酶消化（如胰蛋白酶、胃蛋白酶等）較適用。

第三，抗凝劑的選擇：外周血標(biāo)本可采用EDTA、ACD或肝素抗凝。如果用同一份血標(biāo)本做白細(xì)胞計(jì)數(shù)和流式分析，則應(yīng)用EDTA抗凝；對(duì)于血小板分析的實(shí)驗(yàn)，一般不用肝素抗凝。骨髓穿刺液常用肝素或EDTA抗凝。由于相對(duì)大量的ACD會(huì)通過(guò)改變pH而影響骨髓細(xì)胞活性問(wèn)題，通常不推薦用ACD作骨髓穿刺液的抗凝劑。

第四，樣本的保存：理想狀態(tài)下，樣本應(yīng)在采集后立刻進(jìn)行處理和染色。肝素抗凝的血和骨髓通?？杀４嬷?8-72小時(shí)/室溫（16-25）；EDTA抗凝的外周血和骨髓可保存12-24小時(shí)/室溫（16-25）；ACD抗凝的外周血可保存至72小時(shí)/室溫（16-25）；對(duì)于只作胞內(nèi)染色的樣本，可固定細(xì)胞以長(zhǎng)期保存。但此“固定－染色”的方法取決于要分析的抗原特性和染色方式。

第五，去除紅細(xì)胞的方法：紅細(xì)胞裂解法，操作簡(jiǎn)單、快、并最可能保持原始標(biāo)本的白細(xì)胞分布。最好在染色后溶血。若在染色前溶血，需確認(rèn)：1）抗原性不被溶血過(guò)程改變；2）溶血?jiǎng)┍粡氐紫慈?，?xì)胞和抗體結(jié)合的動(dòng)力反應(yīng)未受影響；3）所用溶血?jiǎng)┎缓潭▌?，否則會(huì)影響細(xì)胞活性及表面標(biāo)記結(jié)果。密度梯度離心法，靶細(xì)胞回收較好并可能得到富集，同時(shí)去除紅細(xì)胞、碎片等，但費(fèi)時(shí)，某些重要細(xì)胞群體可能被選擇性丟失。

第六，細(xì)胞與抗體的比例：廠(chǎng)家推薦的抗體用量通常是假定靶細(xì)胞數(shù)量在5X105～1x106范圍內(nèi)。有些標(biāo)本沒(méi)有足夠的細(xì)胞，有些則由于細(xì)胞量大，正常濃度下的抗體相對(duì)過(guò)量或不足，導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。因此，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)不同于廠(chǎng)家推薦的方法，調(diào)整細(xì)胞與抗體用量，得到最適的細(xì)胞/抗體比例。

第七，細(xì)胞活性的鑒定：死細(xì)胞對(duì)許多抗體均有很強(qiáng)的非特異性染色，這就使樣本細(xì)胞活性檢測(cè)變得非常重要，尤其是經(jīng)過(guò)了長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)輸和儲(chǔ)存的樣本。檢測(cè)的方法通常有兩種：

1）實(shí)時(shí)的流式檢測(cè)：利用熒光染料碘化吡啶（PI）、7氨基放線(xiàn)菌素D（7-AAD）或EMA（ethidiummonoacide）進(jìn)行死細(xì)胞染色，而活細(xì)胞拒染這些染料。此方法的優(yōu)勢(shì)是細(xì)胞表面標(biāo)志和活性分析可同時(shí)進(jìn)行。尤其適用于高度壞死的樣本。7-AAD最常用，因?yàn)樵?88nm激發(fā)下，其最大發(fā)射光在670nm左右，適合與FITC或PE進(jìn)行多色標(biāo)記。但隨著時(shí)間延長(zhǎng)，7AAD會(huì)在固定的細(xì)胞群體重新分配，死活細(xì)胞的區(qū)分變得困難。因此，對(duì)于染色并在固定后12小時(shí)以上分析的標(biāo)本，最好用EMA.EMA與死細(xì)胞DNA穩(wěn)定的共價(jià)結(jié)合保證了長(zhǎng)時(shí)間固定后仍能很好地區(qū)分固定前的死活狀態(tài)。

2）手工檢測(cè)：使用Trypanblue或其他細(xì)胞活性染料。

3）使用專(zhuān)門(mén)的儀器進(jìn)行檢測(cè)。如Vi-cell.