薄層色譜法，系將供試品溶液點樣于薄層板上，經(jīng)展開、檢視后所得的色譜圖，與適宜的對照物按同法所得的色譜對比，用于藥品的鑒別或雜質(zhì)檢查的方法。

1.儀器與材料

（1）薄層板

自制薄層板玻板要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。最常用的固定相有硅膠G、硅膠GF254、硅膠H和硅膠HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶纖維素F254等。其顆粒大小，一般要求直徑為5～40μm.

薄層涂布，一般可分為無黏合劑和含黏合劑兩種；前者系將固定相直接涂布于玻板上，后者系在固定相中加入一定量的黏合劑，一般常用10%～15％煅石膏（CaSO4·2H2O在140℃加熱4小時），混勻后加水適量使用，或用羧甲基纖維素鈉水溶液（0.2%～0.5％）適量調(diào)成糊狀，均勻涂布于玻板上。使用涂布器涂布應能使固定相在玻板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

市售薄層板分普通薄層板和高效薄層板，如硅膠薄層板、硅膠GF254薄層板、聚酰胺薄膜和鋁基片薄層板等。

（2）點樣器同紙色譜法項下。

（3）展開容器應使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開缸，并有嚴密的蓋子，底部應平整光滑，或有雙槽。

（4）顯色劑見各品種項下規(guī)定。可采用噴霧顯色、浸漬顯色或置碘蒸氣中顯色，檢出斑點。

（5）顯色裝置噴霧顯色要求用壓縮氣體使顯色劑呈均勻細霧狀噴出；浸漬顯色可用專用玻璃器械或用適宜的玻璃缸代用；蒸氣熏蒸顯色可用雙槽玻璃缸或適宜大小的干燥器代替。

（6）檢視裝置為裝有可見光、短波紫外光（254nm）、長波紫外光（365nm）光源及相應濾片的暗箱，可附加攝像設備供拍攝圖像用，暗箱內(nèi)光源應有足夠的光照度。

2.操作方法

（1）薄層板制備

自制薄層板除另有規(guī)定外，將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動涂布器進行涂布（厚度為0.2～0.3mm），取下涂好薄層的玻板，置水平臺上于室溫下晾干后，在110℃活化30分鐘，即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度（可通過透射光和反射光檢視）。

市售薄層板臨用前一般應在110℃活化30分鐘。聚酰胺薄膜不需活化。鋁基片薄層板可根據(jù)需要剪裁，但須注意剪裁后的薄層板底邊的硅膠層不得有破損。如在貯放期間被空氣中雜質(zhì)污染，使用前可用適宜的溶劑在展開容器中上行展開預洗，110℃活化后，放干燥器中備用。

（2）點樣除另有規(guī)定外，用點樣器點樣于薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底邊2.0cm，樣點直徑為2～4mm，點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜，一般為1.0～2.0cm。點樣時必須注意勿損傷薄層板表面。

（3）展開展開缸如需預先用展開劑飽和，可在缸中加入足夠量的展開劑，并在壁上貼兩條與缸一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開劑中，密封頂蓋，使系統(tǒng)平衡或按各品種正文規(guī)定操作。［醫(yī)學教育 網(wǎng)搜集整理 ］

將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5～1.0cm（切勿將樣點浸入展開劑中），密封頂蓋，待展開至規(guī)定距離（一般為10～15cm），取出薄層板，晾干，按各品種項下的規(guī)定檢測。

展開可以向一個方向進行，即單向展開；也可以進行雙向展開，即先向一個方向展開，取出，待展開劑完全揮發(fā)后，將薄層板轉(zhuǎn)動90°，再用原展開劑或另一種展開劑進行展開；亦可多次展開。

（4）顯色與檢視熒光薄層板可用熒光猝滅法；普通薄層板，如有色物質(zhì)可直接檢視；無色物質(zhì)可用物理或化學方法檢視。物理方法是檢出斑點的熒光顏色及強度；化學方法一般用化學試劑顯色后，立即覆蓋同樣大小的玻板，檢視。

3.系統(tǒng)適用性試驗

按各品種項下要求對檢測方法進行系統(tǒng)適用性試驗，檢測斑點的檢測靈敏度、比移值（Rf）和分離效能應符合規(guī)定。

（1）檢測靈敏度系指雜質(zhì)檢查時，采用對照溶液稀釋若干倍的溶液與供試品溶液和對照溶液在規(guī)定的色譜條件

下，在同一塊薄層板上點樣、展開、檢視，前者應顯示清晰的斑點。

（2）比移值（Rf）系指從基線至展開斑點中心的距離與從基線至展開劑前沿的距離的比率。

可用計算供試品溶液主斑點與對照品溶液主斑點的比移值進行比較，或用比移值來說明主斑點或雜質(zhì)斑點的位置。

（3）分離效能鑒別時，對照品與結(jié)構相似的藥物對照品制成的混合對照溶液應顯示兩個清晰分離的斑點。雜質(zhì)檢查時，雜質(zhì)對照品用供試品自身稀釋對照溶液或同品種對照品溶液溶解制成的混合對照溶液應顯示兩個清晰分離的斑點，或待測成分與相鄰的雜質(zhì)斑點應清晰分離。［醫(yī)學 教育 網(wǎng)搜集整理 ］

4．測定法

（1）鑒別可采用與同濃度的對照品溶液，在同一塊薄層板上點樣、展開與檢視，供試品溶液所顯主斑點的顏色（或熒光）與位置（Rf）應與對照品溶液的主斑點一致，而且主斑點的大小與顏色的深淺也應大致相同?；虿捎霉┰嚻啡芤号c對照品溶液等體積混合，醫(yī)學 教育 網(wǎng)搜集整理 應顯示單一、緊密的斑點；或選用與供試品化學結(jié)構相似的藥物對照品與供試品溶液的主斑點比較，兩者Rf應不同；或?qū)⑸鲜鰞煞N溶液等體積混合，應顯示兩個清晰分離的斑點。

（2）雜質(zhì)檢查可采用雜質(zhì)對照品法、供試品溶液的自身稀釋對照法或雜質(zhì)對照品法與供試品溶液自身稀釋對照法并用。供試品溶液除主斑點外的其他斑點應與相應的對照品溶液或系列對照品溶液的主斑點比較，或與供試品溶液的自身稀釋對照溶液或系列自身稀釋對照溶液的主斑點比較，不得更深。

通常應規(guī)定雜質(zhì)的斑點數(shù)和單一雜質(zhì)量，當采用系列自身稀釋對照溶液時，也可規(guī)定估計的雜質(zhì)總量。