臨床微生物學(xué)實驗室接到標本后應(yīng)立即進行微生物學(xué)檢驗。主要包括直接鏡檢、檢測特異性抗原或病原體成分、進行分離培養(yǎng)和鑒定、體外藥敏試驗等。
(一)直接鏡檢
標本經(jīng)涂片染色或制備濕片鏡檢,有些標本如尿液、腦脊液等經(jīng)過離心濃縮后鏡檢出其初步結(jié)果對有些病人標本有診斷參考價值。直接鏡檢對于確定進一步檢出步驟及鑒定方法也很有幫助。另外,直接鏡檢還可評價標本是否符合檢驗要求醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理。
(二)快速診斷
快速檢測病原體成分主要是指特異性抗原和核酸檢測。特異性抗原檢測包括免疫熒光技術(shù)、膠乳凝集試驗、酶免疫技術(shù)、對流免疫電泳、化學(xué)發(fā)光免疫測定等。核酸檢測包括核酸探針雜交、PCR技術(shù)。其他快速檢測法還有氣-液相色譜法、化學(xué)發(fā)光、生物發(fā)光測定法和基因或蛋白微型陣列芯片技術(shù)等醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理。
(三)直接藥敏試驗
直接藥敏試驗即在分離培養(yǎng)病原體的同時,直接將臨床標本接種于平板,用抗生素紙片作藥物敏感性試驗,在18~24h內(nèi)可獲得結(jié)果。但因其在試驗時接種量難以標準化,且對混有雜菌和混合感染的標本不易明確其結(jié)果,故分離出純培養(yǎng)物后應(yīng)再作體外藥物敏感試驗。
(四)常規(guī)檢驗
1.分離培養(yǎng):通常由正常無菌部位采取的標本接種血平板,置于空氣或含5%~10%CO2的氣缸中培養(yǎng),大部分細菌可于24~48h生長良好。若原始培養(yǎng)為陰性,但據(jù)鏡檢結(jié)果和臨床信息提示可能有病原菌存在,則應(yīng)再采集大量標本,離心濃縮或溶解離心法處理,取沉淀接種營養(yǎng)豐富的需氧或厭氧培養(yǎng)基來培養(yǎng)。
對于存在正常菌群部位采集的標本,分離時應(yīng)采用選擇培養(yǎng)基以利于病原菌生長,也可加某些抗生素抑制污染菌的生長。對于某些感染標本中發(fā)現(xiàn)的細菌,如尿路感染的尿液中檢出大腸埃希菌,可能是病原菌,也可能是污染菌或正常菌群,其臨床意義的確定有賴于定量培養(yǎng)法。即取一定量的標本如液體標本用液體培養(yǎng)基作一系列稀釋;組織標本稱量后制成懸液,并稀釋成10-1,10-2,10-3等,分別取0.1ml涂布于血瓊脂平板或傾注培養(yǎng),35℃24h后計算每克標本所含細菌數(shù)。
2.鑒定:分離出的細菌一般應(yīng)經(jīng)過細菌形態(tài)、菌落特點、生化反應(yīng)、血清學(xué)試驗、動物接種等鑒定。目前尚有某些微量鑒定系統(tǒng),其鑒定快速、簡便,值得推廣。如用于鑒定腸桿菌科的20E,鑒定非發(fā)酵菌的20NE及鑒定厭氧菌的20A等。
3.體外純菌藥物敏感性試驗:常用方法包括抑菌試驗、殺菌試驗、聯(lián)合藥敏試驗和檢測細菌產(chǎn)生的抗生素滅活酶等醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理。
(五)報告
直接鏡檢要求2h報告,說明標本是否合格,發(fā)現(xiàn)微生物情況和特點;初步鑒定和直接藥敏結(jié)果于24h或次晨報告,報告可能的病原菌和直接藥敏結(jié)果;最后鑒定和細菌藥敏結(jié)果一般不超過3天,還規(guī)定除血培養(yǎng)外,所有送檢標本必須在24h內(nèi)預(yù)報。