摘 要:目的建立實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RFQ-PCR)檢測HBV-DNA含量的方法,探討其在乙型肝炎預(yù)防、診斷、治療及判斷病情等方面的臨床應(yīng)用價(jià)值。
方法 在HBV S基因高保守區(qū)設(shè)計(jì)了特異性的引物和探針,利用TaqMan探針的基本原理,PCR擴(kuò)增目的片段并實(shí)時(shí)檢測產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線,由軟件自動(dòng)計(jì)算出待測樣本中HBV-DNA的準(zhǔn)確含量。
結(jié)果 220例臨床樣本的檢測結(jié)果顯示,乙肝大三陽患者HBV-DNA陽性率(98.8%)顯著高于其它各組(P<0.01),病毒平均含量為7.52±0.43 copies/ml;小三陽患者HBV-DNA陽性率低于大三陽組(P<0.01),但平均病毒含量與大三陽組無差異(P>0.05),高達(dá)7.41±0.26 copies/ml;單獨(dú)HBsAg陽性和單獨(dú)HBsAb陽性組HBV-DNA陽性率分別為56.4%,19.2%,平均病毒含量分別為5.35±0.32 copies/ml,4.02±0.31 copies/ml;80例獻(xiàn)血員血清仍有3例HBV-DNA陽性,其病毒含量低于其它各組。
結(jié)論 RFQ-PCR檢測HBV-DNA含量比ELISA法具有更好的靈敏度和特異性,能準(zhǔn)確反映HBV在體內(nèi)的復(fù)制情況,對臨床上抗病毒藥物的選擇和判斷疾病的預(yù)后意義重大。
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