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狂犬病毒核蛋白單抗和熒光抗體中和試驗的建立與應用

2009-03-17 14:10 來源:
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  摘 要:目的建立狂犬病毒血清中和抗體效價的快速檢測方法,以實現(xiàn)狂犬疫苗免疫效果的定量評價,指導高危人群及動物種群的免疫預防。

  方法 采用常規(guī)方法建立雜交瘤細胞株并制備抗狂犬病毒核蛋白單抗,以親和層析法進行純化,異硫氰酸熒光黃標記制備熒光抗體;以BHK-21細胞系培養(yǎng)狂犬病毒細胞適應株CVS-11,以染毒細胞測定熒光抗體的工作濃度后,通過熒光抗體染色法測定CVS-11細胞半數(shù)感染量(TCID50);利用狂犬病毒滅活疫苗免疫犬制備抗狂犬病毒血清,并以國際獸疫局標準品進行標定;參考世界衛(wèi)生組織及國際獸疫局推薦方法,確定中和試驗程序,對51份樣品血清進行測定,并與國際狂犬病參考實驗室的檢測結果進行比較,評價其精確及可靠程度。以Kaber法公式和Microsoft Excel(R)軟件為基礎,設計被測樣品中和效價計算方法。

  結果 制備的抗狂犬病毒核蛋白單抗的亞型為IgG2a;純化、標記后的熒光抗體工作濃度為1:400;CVS-11株的使用量為每孔100 TCID50;本研究建立的檢測程序對51份人及犬血清測得的中和效價結果與國際參考實驗室的測定結果一致;自行設計的計算方法操作簡便,計算快捷。

  結論 成功建立了與國際標準相當?shù)目袢《局泻涂贵w效價測定和計算方法。

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