目前HPLC法測定HbA1c使其準(zhǔn)確性和重復(fù)性得到很大的提高。美國臨床化學(xué)協(xié)（AACC）糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化分會(huì)和IFCC HbA1C標(biāo)準(zhǔn)化工作組建議，以DCCT研究中所“指定的方法”- HPLC方法作為檢測糖化血紅蛋白的金標(biāo)準(zhǔn)，希望以此使大多數(shù)的實(shí)驗(yàn)方法能夠參照“指定的方法”實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化。

　　1993年美國 1型糖尿病控制及并發(fā)癥實(shí)驗(yàn)（DCCT）和英國大規(guī)模的2型糖尿病控制與并發(fā)癥關(guān)系研究（UKPDS）的研究中把HbA1c作為糖尿病控制的一個(gè)觀察指標(biāo)。1996年4月起在日本，HbA1c被納入老年人保健法中糖尿病篩選的檢查項(xiàng)目。2002年美國糖尿病協(xié)會(huì)（ADA）已將其作為監(jiān)測糖尿病控制的金標(biāo)準(zhǔn)，對其應(yīng)用也作了明確的規(guī)定：即所有糖尿病患者均應(yīng)常規(guī)測定HbA1c。其初診時(shí)測定結(jié)果為基線時(shí)的代謝狀況，此后的測定值則作為糖尿病長期治療控制中的一部分，這樣在提高糖尿病診斷水平、血糖控制、慢性并發(fā)癥的防治中具有十分重要的應(yīng)用價(jià)值。

　　目前通常認(rèn)為檢測HbA1c的臨床意義有三點(diǎn)：

　　1.在糖尿病的篩選普查中有早期提示的價(jià)值，可作為輕癥、2型、“隱性”糖尿病的早期診斷指標(biāo)。

　　2.在糖尿病的治療中， HbA1C是評價(jià)血糖控制好壞的重要標(biāo)準(zhǔn)。

　　3.預(yù)示微、小血管并發(fā)癥，估價(jià)糖尿病慢性并發(fā)癥的發(fā)生與發(fā)展情況。

　　糖化血紅蛋白的幾種不同檢測方法

　　測定GHb主要是利用GHb和Hb的物理化學(xué)性質(zhì)的不同而進(jìn)行的，目前主要的檢測方法有5種：

　　離子交換高效液相色譜分析法- 檢測糖化血紅蛋白HbA1c的金標(biāo)準(zhǔn)

　　基于Hbb鏈N末端纈氨酸糖化后所帶電荷不同而建立。在中性pH條件下,HbA1c攜帶的正電荷相對較少,因此可通過HPLC法將其與其它組分(HbA1c,HbA1b, HbA1a,HbF,HbA0)區(qū)分開,得到分離。此方法曾應(yīng)用于美國DCCT的研究，是目前檢測HbA1c的金標(biāo)準(zhǔn)。

　　微柱法

　　微柱內(nèi)的陽離子交換樹脂（如Biorex 70）在PH近7時(shí)解離后帶陰電荷，而Hb解離后帶陽電荷，二者可形成離子鍵。由于GHb的陽電荷比HbA少，與樹脂的結(jié)合力相對低，容易被洗脫。用分光光度計(jì)分別測定洗脫液中GHb和溶血物中總Hb的吸光率（A），可計(jì)算出GHb占總Hb的百分比（%）。但此方法的影響影響因素比較多：

　　1. 洗脫溫度對結(jié)果有較大影響

　　2. 抗凝劑肝素能使測定結(jié)果增高

　　3. 某些血紅蛋白如HbF異常增加時(shí)，也會(huì)與糖化血紅蛋白同時(shí)洗脫，從而使結(jié)果產(chǎn)生偏差

　　電泳法

　　膠體顆粒在一定條件下可以帶有電荷，帶有電荷的膠體顆?？梢越桁o電吸引力在電場中泳行，帶正電荷者泳向負(fù)極，帶負(fù)電荷者泳向正極，此種現(xiàn)象稱為電泳。血清中各種蛋白質(zhì)都有它特有的等電點(diǎn)，各種蛋白質(zhì)在各自的等電點(diǎn)時(shí)呈中性狀態(tài)，它的分子所帶正電荷與所帶負(fù)電荷量相等。但此方法學(xué)的弱點(diǎn)是：

　　1. 需成批進(jìn)行樣本分析，速度比較慢，無法進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測

　　2. 自動(dòng)化程度低，急診插入、自動(dòng)維護(hù)等功能比較欠缺。

　　親和層析法

　　利用生物高分子能與相應(yīng)的專一配基分子可逆結(jié)合的原理將配基通過共價(jià)鍵牢固地結(jié)合于固相載體上制得親和吸附系統(tǒng)。帶有雜質(zhì)的高分子分離目的物在一定條件下，能以某種次級鍵與已固相化的配基結(jié)合，而雜質(zhì)則不吸附，除去雜質(zhì)后變換條件，又可以使待分離的高分子物質(zhì)重新解離，獲得純化。

　　除葡萄糖外，血液中所有的糖類都可與Hb相結(jié)合，因此該方法的檢測結(jié)果為糖化血紅蛋白總量，而不是HbA1c的含量。

　　 免疫法

　　使用單克隆或多克隆抗體直接測定血紅蛋白β-鏈上糖基化的N末端的4-8個(gè)氨基酸，因此對HbA1C上的糖基特異性好。

　　但是許多同源的糖化血紅蛋白變體也有相同的N末端結(jié)構(gòu)，從而會(huì)對結(jié)果造成干擾。在定標(biāo)方面，需與HPLC作相關(guān)校正。

　　綜合現(xiàn)在臨床實(shí)驗(yàn)室中常用的GHb測定方法，因?yàn)樵淼牟煌瑴y定的結(jié)果準(zhǔn)確度、重復(fù)性都有所差異。相信隨著對HbA1c實(shí)驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)化的重視和提高，HbA1c項(xiàng)目的檢測在臨床會(huì)得到越來越多的應(yīng)用。