（1）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色的原理和臨床意義（偶氮耦聯(lián)法，Kaplow）

【原理】中性粒細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶（neutrophile alkaline phosphatese， NAP）在pH9.2-9.8時(shí)，能水解磷酸萘酚鈉，釋放出磷酸與萘酚，再以重氮鹽與萘酚耦聯(lián)成不溶性有色沉淀于胞質(zhì)內(nèi)酶所存在的部位。

【臨床意義】

1）白血病急性粒細(xì)胞白血病NAP陽性率及積分值均降低，急性淋巴細(xì)胞白血病NAP積分值明顯增高；慢性粒細(xì)胞白血病（無繼發(fā)感染時(shí)）NAP積分值顯著降低，甚至為“0”，類白血病反應(yīng)NAP積分值明顯增高，是兩者鑒別的重要檢測項(xiàng)目；慢性中性粒細(xì)胞白血病NAP積分值顯著增高，常在200分/100NC以上，也有利于與慢性粒細(xì)胞白血病鑒別。

2）其他血液病

各類貧血再障時(shí)NAP積分值增高，陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）和MDS時(shí)NAP積分值一般減低。因此NAP檢測有助于與PNH、MDS等疾病的鑒別。

真性紅細(xì)胞增多癥時(shí)NAP積分值顯著增高，繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥NAP積分正?；蚪档停@是兩者的鑒別方法之一。其他慢性骨髓增生性疾病，如骨髓纖維化、原發(fā)性血小板增多癥等，NAP積分值增高。惡性組織細(xì)胞病時(shí)NAP積分值明顯減低，而反應(yīng)性組織細(xì)胞增多時(shí)NAP積分值往往增高，有助于兩者鑒別。

細(xì)菌性感染時(shí)NAP積分值增高，病毒感染或寄生蟲、立克次體感染時(shí)NAP積分值一般正?；蚪档汀Ｔ摍z測對鑒別細(xì)菌感染與其他感染有一定價(jià)值。

（2）氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色的原理和臨床意義

【原理]】細(xì)胞內(nèi)的氯乙酸AS－D萘酚酯酶（naphythol AS-D chloroacetate esterase，NAS-DCE）水解基質(zhì)液中的氯乙酸AS－D萘酚，產(chǎn)生AS－D萘酚，進(jìn)而與基質(zhì)液中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶所存在的部位。本試驗(yàn)常用的重氮鹽為堅(jiān)牢紫醬GBC，形成的有色沉淀為紅色。NAS－DCE幾乎僅出現(xiàn)在粒細(xì)胞，其特異性高，因此又稱為“粒細(xì)胞酯酶”、“特異性酯酶”。

【臨床意義】臨床上主要用于急性白血病類型的鑒別急性粒細(xì)胞白血病和急性早幼粒細(xì)胞白血病原粒細(xì)胞NAS－DCE染色多呈（＋）-（＋＋），白血病性早幼粒細(xì)胞呈（＋＋）-（＋＋＋）；急性單核細(xì)胞白血病 原、幼單核細(xì)胞多呈陰性反應(yīng)；急性淋巴細(xì)胞白血病原、幼淋巴細(xì)胞呈陰性反應(yīng)。

（3）中性非特異性酯酶染色的原理和臨床意義

【原理】中性非特異性酯酶包括醋酸AS-D萘酚酯酶（naphytholAS-D acetate esterase，NAS-DAE）染色和α-醋酸萘酚酯酶（α-naphythyol acetate esterase ， α-NAE）染色。細(xì)胞內(nèi)的α-醋酸萘酚酯酶（α-naphythyol acetate esterase ， α-NAE）在pH中性的條件下水解基質(zhì)液中的α-醋酸萘酚，釋放出α-萘酚，進(jìn)而與基質(zhì)液中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶所在的部位。

【臨床意義】主要用于急性白血病類型的鑒別。NAS－DAE染色屬于中性非特異性酯酶染色，在鑒別白血病類型時(shí)需同時(shí)做NaF抑制試驗(yàn)。急性粒細(xì)胞白血病的原粒細(xì)胞NAS－DAE染色可呈陽性反應(yīng)，且不被氟化鈉抑制；急性早幼粒細(xì)胞白血病的白血病性早幼粒細(xì)胞NAS－DAE染色為陽性或強(qiáng)陽性反應(yīng)，亦不被氟化鈉所抑制；急性單核細(xì)胞白血病的原、幼單核細(xì)胞NAS－DAE染色多呈陽性或強(qiáng)陽性反應(yīng)，但能被氟化鈉抑制；急性粒－單核細(xì)胞白血病的陽性反應(yīng)的單核細(xì)胞系白血病細(xì)胞能被氟化鈉抑制，而粒系白血病細(xì)胞則不被抑制；急性淋巴細(xì)胞白血病的原、幼淋巴細(xì)胞呈陰性或弱陽性反應(yīng)，且不被氟化鈉抑制。

（4）堿性α-丁酸萘酚酯酶染色的原理和臨床意義

【原理】細(xì)胞內(nèi)的α-丁酸萘酚酯酶（α-naphythyol butyrate esterase， α-NBE）在pH堿性條件下水解基質(zhì)液中的α-丁酸萘酚，釋放出α-萘酚，后者與基質(zhì)液中的重氮鹽耦聯(lián)形成不溶性的有色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶所存在的部位。本試驗(yàn)常用的重氮鹽為堅(jiān)牢紫醬GBC，形成的有色沉淀為紅色。α-NBE主要存在于單核細(xì)胞中，其陽性產(chǎn)物能被氟化鈉抑制，而其他細(xì)胞系列的陽性產(chǎn)物不能被氟化鈉抑制。

【臨床意義】常用于急性白血病類型的鑒別。急性粒細(xì)胞白血病的原粒細(xì)胞和早幼粒細(xì)胞呈陰性反應(yīng)，少數(shù)為弱陽性反應(yīng)；急性單核細(xì)胞白血病的 原、幼單核細(xì)胞多呈陽性反應(yīng)，能被氟化鈉抑制；急性淋巴細(xì)胞白血病的原、幼淋巴細(xì)胞常呈陰性反應(yīng)；多毛細(xì)胞白血病的多毛細(xì)胞呈彌散分布、顆粒細(xì)小的陽性反應(yīng)，亦可見聚成半月形的粗顆粒，不被氟化鈉抑制；惡性組織細(xì)胞病的異常組織細(xì)胞可呈陽性，但不被氟化鈉抑制。

（5）酸性磷酸酶染色的原理和臨床意義

【原理】細(xì)胞內(nèi)的酸性磷酸酶在酸性條件下，將基質(zhì)中的磷酸萘酚AS－BI水解，釋出萘酚AS－BI，再與重氮鹽耦聯(lián)，形成不溶性有色沉淀，定位于胞漿中。

【臨床意義】1）白血病類型鑒別多毛細(xì)胞白血病的多毛細(xì)胞ACP染色呈強(qiáng)陽性或中度陽性反應(yīng)，并耐L－酒石酸抑制作用；急性單核細(xì)胞白血病的原、幼單核細(xì)胞ACP染色為強(qiáng)陽性反應(yīng)；急性淋巴細(xì)胞白血病的原淋巴細(xì)胞ACP染色常呈弱陽性反應(yīng)；急性粒細(xì)胞白血病的原粒細(xì)胞對ACP染色反應(yīng)不一；慢性淋巴細(xì)胞白血病和淋巴瘤的淋巴細(xì)胞ACP染色也可陽性，但可被L－酒石酸抑制，有助于與多毛細(xì)胞鑒別。

2）鑒別T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞 T淋巴細(xì)胞ACP染色呈陽性反應(yīng)，顆粒粗大、密集、局限性塊狀；B淋巴細(xì)胞ACP染色呈陰性反應(yīng)，或?yàn)轭w粒稀疏、細(xì)小的弱陽性反應(yīng)。

3）戈謝細(xì)胞和尼曼－匹克細(xì)胞的鑒別戈謝細(xì)胞ACP染色呈強(qiáng)陽性反應(yīng)；尼曼－匹克細(xì)胞呈陰性或弱陽性反應(yīng)。

（6）酯酶雙染色的原理和臨床意義

【原理】在同一張涂片上進(jìn)行兩種酯酶染色的方法稱為酯酶雙染色。多數(shù)采用一種特異性酯酶加一種非特異性酯酶染色，常用的有α-醋酸萘酚酯酶與氯乙酸AS－D萘酚酯酶雙染色、α-丁酸萘酚酯酶與氯乙酸AS－D萘酚酯酶雙染色等。反應(yīng)的原理基本上同各自的染色原理，同一張涂片上的細(xì)胞要分別在兩種不同的基質(zhì)液中作用一定時(shí)間，最后復(fù)染、顯微鏡觀察。

【臨床意義】酯酶雙染色可同時(shí)觀察兩種不同的白血病細(xì)胞，因此在鑒別白血病類型方面明顯優(yōu)于單項(xiàng)染色。

1）急性粒－單核細(xì)胞白血病該染色法在急性粒－單核細(xì)胞白血病的同一張涂片上可分別出現(xiàn)α-NBE染色和NAS-DCE染色陽性反應(yīng)的細(xì)胞，甚至少數(shù)病例在單個(gè)細(xì)胞內(nèi)同時(shí)出現(xiàn)以上兩種酯酶染色的雙重陽性反應(yīng)，醫(yī)學(xué)教育|網(wǎng)搜集整理因此酯酶雙染色反應(yīng)在急性粒－單核細(xì)胞白血病的診斷上具有獨(dú)特價(jià)值。

2）急性粒細(xì)胞白血病粒細(xì)胞白血病NAS－DCE染色可出現(xiàn)不同程度的陽性反應(yīng)，α-NBE染色則為陰性。

3）急性單核細(xì)胞白血病 α-NBE染色為陽性或強(qiáng)陽性反應(yīng)，NAS－DCE染色為陰性，有助于與急性粒細(xì)胞白血病的鑒別。

4）急性淋巴細(xì)胞白血病 NAS－DCE染色及α-NBE染色在淋巴細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)。

（7）骨髓鐵染色的原理和臨床意義

【原理]】骨髓中的含鐵血黃素（細(xì)胞外鐵）和中、晚幼紅細(xì)胞胞漿中的鐵蛋白聚合物（細(xì)胞內(nèi)鐵）經(jīng)普魯士藍(lán)反應(yīng)形成藍(lán)色的亞鐵氰化鐵沉淀，定位于細(xì)胞內(nèi)外鐵存在的部位。正常人骨髓細(xì)胞外鐵為+-++.鐵粒幼細(xì)胞陽性率為19%-44%.鐵染色（iron stain；IS）中的細(xì)胞外鐵反映骨髓中鐵的儲(chǔ)存量，細(xì)胞內(nèi)鐵反映骨髓中可利用鐵的量。

【臨床意義】 1）鑒別缺鐵性貧血與非缺鐵性貧血，前者細(xì)胞外鐵減少甚至消失，鐵粒幼細(xì)胞的陽性率明顯減低，鐵顆粒著色淺淡。

2）有助于鐵粒幼細(xì)胞貧血的診斷和鑒別診斷。鐵粒幼細(xì)胞貧血時(shí)鐵粒幼細(xì)胞增多，且可見環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞，比例可達(dá)30%-90%.MDS的RAS型也可見環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞增多（占幼紅細(xì)胞的15%或更多），借此可與再生障礙性貧血鑒別。