醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)小編整理了公衛(wèi)執(zhí)業(yè)助理醫(yī)師考試大綱中部分內(nèi)容，希望對(duì)參加考試的考生有所幫助。

多肽鏈的氨基酸組成往往是比較復(fù)雜，因此直接分析多肽的氨基酸順序還是很困難的，多采用將多肽鏈進(jìn)一步降解成為更小的片段，然后再行分析。肽鍵的裂解是一級(jí)結(jié)構(gòu)研究工作中的重要問(wèn)題，它要求裂解點(diǎn)少，選擇性強(qiáng)，而且反應(yīng)產(chǎn)率高，目前主要有化學(xué)法和酶解法兩類(lèi)。

1、化學(xué)法

（1）溴化氰法是最理想的化學(xué)方法，能選擇性斷裂甲硫氨酸所在的肽鍵

溴化氫化學(xué)降解法其優(yōu)點(diǎn)：

①一般蛋白質(zhì)含甲硫氨酸較少，由此可獲得大片段

②專(zhuān)一性強(qiáng)

③產(chǎn)率高達(dá)80%以上

④作用條件溫和，在室溫中用幾到十幾小時(shí)即可。

（2）部分酸水解法

Sanger在分析胰島素的一級(jí)結(jié)構(gòu)中采用了此法，即用0.1N鹽酸在110℃或用6N鹽酸在37℃水解。這種部分酸水解的方法特異性不強(qiáng)，因此對(duì)大片段的蛋白質(zhì)和肽均不合適。

（3）羥胺法

這種方法近十年來(lái)開(kāi)始受人注意，羥胺能專(zhuān)一性地裂解Asn�睪ly的肽鍵，酸性條件下裂解Asn-Pro肽鍵。已用于某些蛋白質(zhì)的分析。

（4）N-溴代琥珀酰亞胺法

主要裂解Try處的肽鍵，五十年代研究較多。但由于它也能斷裂Tyr�睭is肽鍵，因此應(yīng)用不廣。

2、酶解法

酶水解法較化學(xué)法具有更多的優(yōu)越性，使用也更廣泛。因其具有較高專(zhuān)一性，而且水解產(chǎn)率較高，所以可以選擇各種不同專(zhuān)一性的酶進(jìn)行專(zhuān)一性的斷裂。

常用的酶有胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶和嗜熱菌蛋白酶。

胰蛋白酶專(zhuān)一斷裂Lys，Arg的羧基側(cè)肽鍵，如果對(duì)Lys，Arg，CysH進(jìn)行化學(xué)修飾可改變胰蛋白酶的斷裂性質(zhì)。

（1）賴(lài)氨酸的修飾。將Lys用順丁烯二酸酐或甲基順丁烯二酸桿修飾，則胰蛋白酶僅使Arg肽鍵斷裂。

順丁烯衍生物在中性pH下穩(wěn)定，胰蛋白酶水解僅使Arg鍵斷裂。在酸性條件下順丁烯衍生物可脫去封閉，此時(shí)再行胰蛋白酶水解，則得賴(lài)氨酸為末端的多肽。下述為蛋白質(zhì)中的賴(lài)氨酸，經(jīng)順丁烯�；�作用后，被胰蛋白酶水解的例子。

（2）精氨酸的修飾。精氨酸與1，2-和1，3-二羰化合物作用，縮合產(chǎn)物是一雜環(huán)化合物，十分穩(wěn)定。然后胰酶水解僅斷裂賴(lài)氨酸殘基末端的肽鍵

（3）半胱氨酸的修飾。若肽鏈內(nèi)Lys、Arg均較少，則為了增加胰酶的裂解點(diǎn)，可以將半胱氨酸進(jìn)行氨乙基化，其產(chǎn)物氨乙基半胱氨酸有類(lèi)似Lys的結(jié)構(gòu)，胰蛋白酶在水解時(shí)，不能識(shí)別這微細(xì)的變化，從而在半胱氨酸處斷裂。