T細(xì)胞計(jì)數(shù)
(1)E花環(huán)法:人類T細(xì)胞表面有SRBC受體(CD2)能與SRBC結(jié)合形成玫瑰花環(huán)樣結(jié)構(gòu),將經(jīng)分層液分離現(xiàn)的RBM懸液與SRBC在含有血清的平衡鹽水中混合,經(jīng)37℃培養(yǎng)5~10分鐘放4℃過夜,取細(xì)胞懸計(jì)數(shù),外周血淋巴細(xì)胞中約70%~80%淋巴細(xì)胞結(jié)成花環(huán)即為T細(xì)胞。目前此方法已用來分離T細(xì)胞,而不用做T細(xì)胞計(jì)數(shù)。
(2)用單克隆抗體計(jì)數(shù)T細(xì)胞:將人的PBM分成三等份,分別用小鼠抗人CD3、CD4和CD8的單克隆抗體作第一抗體與細(xì)胞結(jié)合,再用FITC標(biāo)記的兔抗小鼠IgG抗體作第二抗體進(jìn)行間接免疫熒光染色醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理,在熒光顯微鏡下或流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果,在PBM中被CD3抗體染上熒光的細(xì)胞稱為CD3+細(xì)胞即總T細(xì)胞。正常人在PBM中T細(xì)胞占70%~80%.正常人的CD4+細(xì)胞和CD8+細(xì)胞之和應(yīng)與CD3+細(xì)胞數(shù)一致。CD4+細(xì)胞與CD8+細(xì)胞的比值正常人約為2/1而艾滋病患者則比值小于1.7.
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