純淋巴細(xì)胞群的三種采集方法:
通常利用單核細(xì)胞在37℃和Ca2+存在條件下醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理,能主動粘附在玻璃、塑料、尼龍毛、棉花纖維或葡聚糖凝膠的特性,據(jù)此建立許多從單個核細(xì)胞懸液中去除單核細(xì)胞的方法,藉以獲得高純度的淋巴細(xì)胞群。
(一)粘附貼壁法
將已制備的單個核細(xì)胞懸液傾于玻璃或塑料平皿或扁平小瓶中,移至37℃溫箱靜置1h左右,單核細(xì)胞和粒細(xì)胞均貼于平皿壁上,而未貼壁的非粘附細(xì)胞幾乎為純淋巴細(xì)胞,繼用橡皮刮下貼壁的細(xì)胞即為純單核細(xì)胞群。因B細(xì)胞也有貼壁現(xiàn)象,用本法分離的淋巴細(xì)胞群中B細(xì)胞有所損失。
(二)吸附柱過濾法
將單個核細(xì)胞懸液注入裝有玻璃纖維或葡聚糖凝膠SephadexG10的柱層中,凡有粘附能力的細(xì)胞絕大部分被吸附而粘滯在柱層中,從柱上洗脫下來的細(xì)胞主要是淋巴細(xì)胞。此法簡單易行,對細(xì)胞極少損害。
(三)磁鐵吸引法
利用單核細(xì)胞具有吞噬的特性,在單個核細(xì)胞懸液中加直徑為3μm的羰基鐵顆粒,置37℃溫箱內(nèi)短時旋轉(zhuǎn)搖動,待單核細(xì)胞充分吞噬羰基鐵顆粒后,用磁鐵將細(xì)胞吸至管底,上層液中含較純的淋巴細(xì)胞。