免疫組織化學(xué)應(yīng)用的基本原則：

免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry）又稱免疫細(xì)胞化學(xué)，是指帶顯色劑標(biāo)記的特異性抗體在組織細(xì)胞原位通過(guò)抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對(duì)相應(yīng)抗原進(jìn)行定性、定位、定量測(cè)定的一項(xiàng)新技術(shù)。

免疫組織化學(xué)染色在生物醫(yī)學(xué)研究中具有十分廣泛的作用。并且涉及許多研究領(lǐng)域。但是，免疫組織化學(xué)技術(shù)也有其局限性，例如，組織細(xì)胞內(nèi)的待測(cè)物質(zhì)要有抗原性，而且需要有一定濃度方可檢出；檢出的免疫反應(yīng)陽(yáng)性蛋白不能被確定是細(xì)胞新合成的蛋白還是通過(guò)細(xì)胞間運(yùn)輸而來(lái)的蛋白，因此，在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中應(yīng)充分考慮這些特點(diǎn)。如果實(shí)驗(yàn)需要證明已知蛋白為何種細(xì)胞合成，需采用分子原位雜交技術(shù)解決。為引導(dǎo)初學(xué)者在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中合理巧妙地運(yùn)用免疫組織化學(xué)技術(shù)，將其應(yīng)用的基本原則簡(jiǎn)述如下：

1.確定細(xì)胞類型和形態(tài)。組織細(xì)胞內(nèi)有些蛋白具有組織特異性，如膠質(zhì)原纖維酸性蛋白（gial fibrillary acidic protein，GFAP）只存在于星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)。神經(jīng)絲蛋白（Neurofilament，NF）只存在于神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)。通常把這些具有組織特異性的蛋白稱為標(biāo)記性蛋白（Proteiniliaker）。通過(guò)標(biāo)記性蛋白的特異性抗體可確定細(xì)胞種類。有些細(xì)胞（如表皮內(nèi)朗格漢斯細(xì)胞和黑色素細(xì)胞等）在光鏡下不易辨認(rèn)，通過(guò)對(duì)胞質(zhì)內(nèi)的特定蛋白實(shí)施免疫組化染色，便能清楚顯示此類細(xì)胞外形輪廓。這種作用在神經(jīng)科學(xué)研究和腫瘤臨床病理中顯得尤為重要。

2.辨認(rèn)細(xì)胞產(chǎn)物的來(lái)源。利用某些細(xì)胞產(chǎn)物為抗原，制備相應(yīng)的抗體，對(duì)組織細(xì)胞實(shí)施免疫組織化學(xué)染色，以確定細(xì)胞產(chǎn)物的來(lái)源。如內(nèi)分泌細(xì)胞產(chǎn)生的各種激素，大多數(shù)可用免疫組化染色技術(shù)辨認(rèn)，據(jù)此可研究細(xì)胞的分泌功能及對(duì)內(nèi)分泌腫瘤作功能分類，檢測(cè)分泌異位激素的腫瘤等，了解細(xì)胞分化程度。

3.確定細(xì)胞的分化程度分化程度。不同的同一類細(xì)胞多表達(dá)不同的標(biāo)志性蛋白，根據(jù)對(duì)這些不同蛋白的鑒定可確定細(xì)胞的分化程度。例如，神經(jīng)上皮細(xì)胞的標(biāo)志性蛋白是巢蛋白（nestin），當(dāng)其分化為放射狀膠質(zhì)細(xì)胞時(shí)表達(dá)波形蛋白（vimentin）。醫(yī)|學(xué)教育網(wǎng)整理在神經(jīng)元發(fā)生期分化為成神經(jīng)細(xì)胞時(shí)則表達(dá)Ⅲβ神經(jīng)微管蛋白（TUJl），成神經(jīng)細(xì)胞分化為成熟的神經(jīng)元時(shí)表達(dá)神經(jīng)絲蛋白（neurofilament，NF）。

4.追蹤神經(jīng)纖維束和它的投射區(qū)。用于此目的的免疫組織化學(xué)方法常與軸漿運(yùn)輸示蹤法相結(jié)合來(lái)研究神經(jīng)元之間的聯(lián)系。軸漿運(yùn)輸示蹤法是利用某些物質(zhì)可被神經(jīng)末梢攝取。經(jīng)軸質(zhì)逆行運(yùn)輸?shù)桨w的特點(diǎn)。用組織化學(xué)方法顯示出神經(jīng)元的輪廓。常用示蹤劑有辣根過(guò)氧化物酶和熒光金等。例如。為觀察周圍神經(jīng)系統(tǒng)或中樞神經(jīng)系統(tǒng)某核團(tuán)神經(jīng)纖維投射。先將示蹤劑注射到動(dòng)物神經(jīng)纖維末梢部位，使動(dòng)物存活一段時(shí)間，在預(yù)期神經(jīng)纖維投射部位取材，先通過(guò)組織化學(xué)方法使示蹤劑定位，再實(shí)施免疫組織化學(xué)方法確定其性質(zhì)。

5.在臨床病理中的應(yīng)用。如鑒定病變性質(zhì)，發(fā)現(xiàn)微小病灶，探討腫瘤起源或分化表型，確定腫瘤分期，指導(dǎo)治療和預(yù)后。輔助疾病診斷和分類，尋找感染病因等。