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化學發(fā)光酶的免疫測定

2016-08-19 11:08 來源:
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“化學發(fā)光酶免疫測定”是考試中經(jīng)常會遇到的知識點,醫(yī)學教育網(wǎng)小編整理了相關(guān)知識供大家參考學習,希望對大家有所幫助!

從標記免疫測定來看,化學發(fā)光酶免疫測定(chemiluminescentenzymeimmunoasssay,CLEIA)應(yīng)屬酶免疫測定。測定中2次抗原抗體反應(yīng)步驟均與酶免疫測定相同,僅最后一步酶反應(yīng)所用底物為發(fā)光劑,通過化學發(fā)光反應(yīng)發(fā)出的光在特定的儀器上進行測定。兩種常用的標記酶,辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(AP)均有其發(fā)光底物,由此建立的CLEIA均在臨床檢驗中應(yīng)用。

(一)HRP標記的CLEIA

常用的底物為魯米諾或其衍生物。魯米諾的氧化反應(yīng)在堿性緩沖液中進行,通常以0.1mol/LpH8.6Tris緩沖液作底物液,魯米諾和H2O2在無HRP催化時也能緩慢自發(fā)發(fā)光,而在最后光強度測定中造成空白干擾,因而宜分別配制成2瓶試劑溶液,只在用前即刻混合。醫(yī)學教育網(wǎng)|搜集整理

HRP催化魯米諾氧化的反應(yīng)可被某些酚試劑(如鄰-碘酚)或螢火蟲熒光素酶等加強。加強劑的作用是增強發(fā)光和延長發(fā)光時間,由此可提高敏感度。

(二)AP標記的CLEIA

在以AP為標記酶的CLEIA中,應(yīng)用的底物為adamantyldioxetasephosphate,有不少衍生物的商品試劑如PPD可供應(yīng)用。

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