酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的方法類型及反應(yīng)原理 ，快來(lái)跟著小編了解一下吧！

（一）檢測(cè)抗原的方法

1.雙抗體夾心法：屬于非競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，檢測(cè)抗原最常用的方法，檢測(cè)含有至少兩個(gè)抗原決定簇的多價(jià)抗原。原理是先將特異性抗體與固相載體連接；加入待測(cè)標(biāo)本，形成固相抗原抗體復(fù)合物；再加入酶標(biāo)抗體形成雙抗體夾心，洗滌；加底物顯色，根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量檢測(cè)。

如血清標(biāo)本中有類風(fēng)濕因子（RF）存在，則可出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)，因?yàn)镽F是一種抗變性IgG的自身抗體，它能與多種動(dòng)物的變性IgG的Fc部分結(jié)合，因此RF就可作為固相抗體和酶標(biāo)抗體之間的橋接抗原。

雙抗體夾心法只適用于二價(jià)或以上的較大分子抗原的測(cè)定，不能用于小分子半抗原的檢測(cè)。

2.雙位點(diǎn)一步法：針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同且空間距離較遠(yuǎn)的決定簇，包被使用一種單抗，酶標(biāo)記使用另一種單抗。測(cè)定時(shí)將待測(cè)抗原和酶標(biāo)抗體同時(shí)加入，溫育、洗滌，加入底物顯色。若待測(cè)抗原濃度過(guò)高時(shí)，過(guò)量的抗原可分別同固相抗體和酶標(biāo)抗體結(jié)合而抑制夾心復(fù)合物的形成，出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)，顯色降低，甚至假陰性。必要時(shí)可將標(biāo)本經(jīng)過(guò)適當(dāng)稀釋后重復(fù)測(cè)定。

3.競(jìng)爭(zhēng)法

用于測(cè)定小分子抗原，如藥物、激素等。原理為先用抗小分子的特異性抗體包被固相，然后同時(shí)加入待測(cè)樣本和酶標(biāo)記的小分子，兩種小分子競(jìng)爭(zhēng)與固相上的抗小分子的特異性抗體結(jié)合，溫育一定時(shí)間后洗滌，加入酶底物顯色。

特點(diǎn)是：

①酶標(biāo)記抗原與樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的非標(biāo)記抗原具有相同的與固相抗體結(jié)合的能力；

②反應(yīng)體系中，固相抗體和酶標(biāo)抗原是固定限量，且前者的結(jié)合位點(diǎn)少于酶標(biāo)記和非標(biāo)記抗原的分子數(shù)量和；

③免疫反應(yīng)后，結(jié)合于固相載體上復(fù)合物中被測(cè)定的酶標(biāo)抗原的量（酶活性）與樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中非標(biāo)記抗原的濃度成反比。

（二）檢測(cè)抗體的方法

1.間接法：最常用的方法，屬非競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合試驗(yàn)。原理：將抗原包被在固相載體上，加入待測(cè)樣本形成固相抗原-受檢抗體復(fù)合物；經(jīng)溫育洗滌后，加入酶標(biāo)二抗，常用羊抗人IgG，在固相上即形成固相抗原-待測(cè)抗體-酶標(biāo)抗抗體復(fù)合物，加入底物后根據(jù)顯色的深淺確定待測(cè)抗體含量。多用于檢測(cè)IgG類型抗體。

2.雙抗原夾心法

此法可檢測(cè)各類抗體，因此雙抗原夾心法的靈敏度和特異性要高于間接法。其原理及操作步驟類似雙抗體夾心法，也可采用一步法。由于機(jī)體產(chǎn)生抗體IgG的效價(jià)有限，一般不會(huì)出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)。

臨床上乙型肝炎表面抗體的測(cè)定常用此法。

3.競(jìng)爭(zhēng)法

一般抗體檢測(cè)是較少采用，當(dāng)相應(yīng)抗原材料中含有與抗人IgG反應(yīng)的物質(zhì)，而且不易得到足夠的純化抗原或抗原的結(jié)合特異性不穩(wěn)定時(shí)，可采用這種方法測(cè)定抗體，目前臨床運(yùn)用較多的是乙型肝炎病毒核心抗體（HBcAb）和乙型肝炎病毒e抗體（HBeAb）的檢測(cè)。

競(jìng)爭(zhēng)抗體與待測(cè)抗體的特異性及親和力越接近，則測(cè)定的可靠性越強(qiáng)。

4.捕獲法又稱反向間接法

主要用于血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測(cè)定，最常用的是病原體急性感染診斷中的IgM型抗體。原理：先將針對(duì)IgM的二抗包被于固相載體，加入待測(cè)標(biāo)本，其中IgM類抗體可被固相抗體捕獲，再加入特異性抗原，其與固相上捕獲的IgM抗體結(jié)合后，加入酶標(biāo)記特異性抗原的抗體，形成固相二抗-IgM-抗原-酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，加底物顯色后，即可對(duì)待測(cè)標(biāo)本中IgM是否存在及含量進(jìn)行測(cè)定。

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