放射免疫分析的實(shí)驗(yàn)方法及測(cè)定，快來(lái)跟著小編了解一下吧！

（一）抗原抗體反應(yīng)：將未標(biāo)記抗原（標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品）、標(biāo)記抗原和特異性抗體加入反應(yīng)試管中，在一定條件（溫度、時(shí)間及介質(zhì)pH）下進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)抑制反應(yīng)。

先加待測(cè)樣品（或標(biāo)準(zhǔn)品）和抗血清，使非標(biāo)記抗原與抗體達(dá)到結(jié)合平衡，然后再加入標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)與抗體結(jié)合。

（二）分離結(jié)合與游離標(biāo)記物：RIA反應(yīng)平衡后，標(biāo)記抗原與試劑抗體形成免疫復(fù)合物（B）。由于其含量極少，不能自行沉淀，需加入適當(dāng)?shù)某恋韯⑵鋸氐壮恋恚缓蠼?jīng)離心使其與游離的標(biāo)記抗原（F）分離。某些小分子抗原，也可采用吸附法分離B與F。

理想的分離方法應(yīng)分離徹底、迅速；分離試劑和過(guò)程不影響反應(yīng)平衡，而且效果不受反應(yīng)介質(zhì)因素的影響；操作應(yīng)簡(jiǎn)單、重復(fù)性好以及經(jīng)濟(jì)。方法：

1.第二抗體沉淀法：反應(yīng)完成后加入二抗形成復(fù)合沉淀。為增強(qiáng)效果可加入一定量的與一抗同種動(dòng)物的血清或IgG，或是將二抗與某些顆粒固相物連接。

2.聚乙二醇（PEG）沉淀法：能非特異地沉淀抗原抗體復(fù)合物等大分子蛋白質(zhì)，而不沉淀小分子抗原。當(dāng)溫度髙于30℃時(shí)，沉淀物易復(fù)溶。

3.PR試劑法 先將二抗與PEG按一定比例混合成懸液后進(jìn)行試驗(yàn)。此法保留了二者的優(yōu)點(diǎn)，節(jié)省了二者的用量，且分離迅速，簡(jiǎn)便。

4.活性炭吸附法：活性炭可吸附小分子游離抗原或半抗原，而大分子蛋白（如抗體和免疫復(fù)合物）則留在溶液中。

（三）放射性測(cè)量及數(shù)據(jù)處理

分離B、F后，可分別對(duì)二者進(jìn)行測(cè)定。

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（劑量-反應(yīng)曲線），樣品管以其測(cè)量或計(jì)算的反應(yīng)參數(shù)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可查出相應(yīng)的待檢抗原濃度。

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