生物素標(biāo)記蛋白質(zhì)的標(biāo)記方法是什么?注意事項(xiàng)是什么?
生物素標(biāo)記蛋白質(zhì)的標(biāo)記方法是什么?注意事項(xiàng)是什么?為了幫助各位考生了解,醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理如下:
標(biāo)記方法
1.標(biāo)記抗體、抗原:由于一個(gè)抗體分子可連接多個(gè)生物素分子,因此一個(gè)生物素化的抗體分子在反應(yīng)時(shí)可與多個(gè)親和素分子結(jié)合。通常選用第二抗體進(jìn)行生物素標(biāo)記,制備的標(biāo)記物具有通用性。
2.標(biāo)記酶:如生物素標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶(HRP)。
標(biāo)記注意事項(xiàng)
1.應(yīng)根據(jù)抗原或抗體分子結(jié)構(gòu)中所帶可標(biāo)記基團(tuán)的種類(氨基、醛基或巰基)以及分子的理化性質(zhì)(酸性、中性或堿性),選擇相應(yīng)的活化生物素和反應(yīng)條件。
2.標(biāo)記反應(yīng)時(shí),活化生物素與待標(biāo)記抗原或抗體應(yīng)有適當(dāng)?shù)谋壤?,使每個(gè)蛋白質(zhì)分子上標(biāo)記的生物素分子數(shù)量控制在一定范圍,以免影響標(biāo)記物的活性。
3.為減少生物素標(biāo)記蛋白質(zhì)后,大分子物質(zhì)造成的空間位阻影響,有利于生物素與親和素的結(jié)合,可在生物素與被標(biāo)記物間加入交聯(lián)臂樣結(jié)構(gòu)。
4.生物素與抗原、抗體等蛋白質(zhì)結(jié)合后,不影響后者的免疫活性;標(biāo)記酶時(shí)則結(jié)果有不同。
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